Найти и заменить: существует ли альтернатива пробе Манту

Статья на конкурс «био/мол/текст»: Несмотря на стремительное развитие медицины, туберкулез не спешит сдавать свои позиции, оставаясь не только актуальным и смертоносным, но и трудно диагностируемым заболеванием. А ведь своевременная диагностика — это возможность снизить количество больных активными формами и повлиять на распространение инфекции! Традиционно для диагностики туберкулеза применяют пробу Манту 2 ТЕ. Тем не менее в последние годы появились альтернативные методы — «Диаскинтест» и анализ крови IGRA (Interferon Gamma Release Assay). Что это за тесты и в состоянии ли они полностью заменить «старушку» пробу Манту, которой недавно исполнилось 110 лет?

Конкурс «био/мол/текст»-2018

Эта работа опубликована в номинации «Биофармацевтика» конкурса «био/мол/текст»-2018.

Партнер номинации — медицинская .

Генеральный спонсор конкурса — : крупнейший поставщик оборудования, реагентов и расходных материалов для биологических исследований и производств.

Спонсором приза зрительских симпатий выступил медико-генетический центр Genotek.

«Книжный» спонсор конкурса — «Альпина нон-фикшн»

Проблема лечения и диагностики туберкулеза до сих пор остается чрезвычайно актуальной. И дело не только в том, что палочка Коха (Mycobacterium tuberculosis) развивает поразительную устойчивость к антибиотикам: ситуацию осложняет еще и длительный инкубационный период заболевания. Фактически, мы имеем дело с возбудителем, носители которого могут долгое время быть совершенно здоровы! В придачу, существуют не только активные формы туберкулеза, но и латентное носительство. А предсказать, перейдет ли оно в активную форму и когда это случится, чрезвычайно трудно. Однако не все так плохо, потому что даже латентное носительство можно диагностировать и в случае необходимости пролечить. Вопрос лишь в том, что до сих пор не разработано точного и эффективного метода диагностики туберкулезных процессов. Поэтому долгие годы ученые пытаются разработать «идеальный» тест, который позволил бы отличить туберкулез от постпрививочного иммунитета и латентного носительства, имел бы низкую себестоимость и не зависел от человеческого фактора.

Тем не менее диагностика — это еще не диагноз, и результат любого теста не является истиной в последней инстанции. Диагноз же по-прежнему ставят, исходя из нескольких составляющих:

• клинической картины;
• наличия контакта с туберкулезным больным;
• рентгенографии легких, флюорографии или компьютерной томографии;
• результатов диагностических тестов.

Однако большинство этих методов диагностируют туберкулез постфактум — только скрининговые тесты помогают выделить лиц с высоким риском развития заболевания или с только зарождающимся процессом. И уже более 100 лет основным методом массовой диагностики туберкулеза является туберкулиновая проба Манту 2 ТЕ (содержащая 2 туберкулиновые единицы). Тест спорный, со множеством ложноположительных результатов, но именно его используют во всем мире и отказываться пока не собираются.

Проба Манту

Проба Манту 2 ТЕ — это специфический кожный тест на основе туберкулина. Туберкулин является смесью разнообразных антигенов, полученных из инактивированной микобактерии туберкулеза и продуктов ее жизнедеятельности (белков, полисахаридов, нуклеиновых кислот — всего около 200 наименований [1], [2]). Также в состав препарата для пробы Манту входят фенол в качестве консерванта, стабилизатор «Твин-80», соли фосфатного буферного раствора и хлорид натрия.

Смысл этой пробы в том, что организм человека, зараженного микобактерией туберкулеза, будет реагировать на введение ее частичек выработкой Т-лимфоцитов [3]. Если же человек здоров, подобной реакции не будет. Однако тут есть одно но: антигены, входящие в состав туберкулина, характерны не только для палочки Коха, но и для других штаммов микобактерии, в том числе и для M. bovis — основы прививки БЦЖ. Поэтому проба Манту плохо «различает» привитых этой вакциной и реально заболевших туберкулезом.

В мире используют 3 вида туберкулина (рис. 1): датский препарат PPD (purified protein derivative) RT 23, американский PPD-S и российский — PPD-L. Различаются они видами микобактерий, из которых были получены: при производстве датского и американского препаратов используют только M. tuberculosis, а при производстве российского — смесь из M. tuberculosis и M. bovis (микобактерии, вызывающей туберкулез у крупного рогатого скота; на основе этого штамма была разработана вакцина БЦЖ). Различие в составах туберкулина обусловливает разные границы положительного результата: 15 мм для детей, привитых БЦЖ, и не более 10 мм для непривитых детей до 5 лет у датского препарата, не более 10 мм у американского и 5 мм у российского [4].

Nationwide shortage of tuberculin skin test antigens

Диагностику с помощью пробы Манту проводят следующим образом: небольшое количество туберкулина вводят под кожу чуть выше запястья и через 72 часа оценивают реакцию, которую считают положительной, если в месте введения появляется припухлость (папула) более 5 мм в диаметре. В зависимости от ее размера, различают степень реакции от отрицательной (0–1 мм) до резковыраженной, или гиперергической (17 мм и более у детей и подростков, 21 мм и более у взрослых) [5]. И тут начинаются трудности, потому что у привитых БЦЖ реакция Манту положительна [6]! Мало того, чем больше поствакцинальный рубец, тем выше чувствительность к туберкулину [7]. Поэтому у привитых БЦЖ оценивают не только диаметр папулы, но и размер поствакцинального рубчика (табл. 1).
Таблица 1. Соотношение размера папулы и рубчика после прививки БЦЖ.[8]

Безусловно, метод оценки результата довольно субъективный. Но главное, папулу надо еще правильно измерить, зафиксировав только размер выпуклой части и игнорируя покраснение вокруг нее (рис. 2).

«Стоит ли переживать, если размер манту 10 мм»

Впрочем, основной недостаток пробы Манту не в этом: проблема в том, что с ее помощью трудно отличить поствакцинальный иммунитет от заболевания, а цена ошибки — «ненужный» курс антибиотиков. Поэтому чаще всего ее результат — это только первый шаг, лишь подозрение на туберкулез. Что интересно, при тяжелом течении болезни из-за неадекватного Т-клеточного ответа реакция на туберкулин обычно отсутствует [6], однако эту фазу заболевания уже хорошо видно и по клинической картине, и на рентгенограмме.

Еще одна трудность с диагностическими возможностями пробы Манту связана с тем, что они зависят от нижней границы положительного результата: чем ниже граница, тем больше будет наблюдаться ложноположительных реакций. К примеру, в России пороговым значением является папула в 5 мм. Это приводит к гипердиагностике — большому количеству зафиксированных реакций, но в итоге к низкому проценту реально выявленных случаев инфицирования [4].

В общем, не удивительно, что в последнее время информативность туберкулиновой пробы постоянно ставится под сомнение. Мало того, она может вызывать не связанные с туберкулезом аллергические реакции, поэтому все больше здоровых, но склонных к аллергии детей вынуждены идти в тубдиспансер в надежде выяснить причину положительной реакции. И наконец, на результат пробы может влиять множество факторов: недавно перенесенные инфекции, хронические заболевания, прием медикаментов, изменение гормонального фона или иммунитет к нетуберкулезным микобактериям [7].

Если говорить о достоинствах пробы Манту, то кроме низкой себестоимости, ими будут возможность выявления туберкулеза на ранних стадиях развития (за исключением лиц с иммуносупрессией и маленьких детей до двух лет [7]) и более высокая диагностическая ценность у непривитых БЦЖ по сравнению с привитыми (от 50% и ниже против 65,4% [6], [9]).

Мифы о пробе Манту

• Туберкулин вреден для здоровья, потому что инактивированные микобактерии вызывают аллергию и «нагружают иммунитет». Здесь есть небольшая доля правды: как препарат, туберкулин может вызывать аллергические реакции, не связанные с инфицированием, однако ни о какой «нагрузке» не может быть и речи, хотя бы потому что на него не вырабатываются антитела.
• Проба Манту 2 ТЕ токсична, так как препарат содержит фенол. В туберкулиновой пробе фенол является консервантом, подавляющим рост бактерий и грибков [5]. При этом его количество настолько мало (0,00025 г), что не может оказать влияние на здоровье. Фенол является продуктом метаболизма бактерий, населяющих наш кишечник, поэтому он образуется в тканях организма, попадает в кровь и выводится с мочой. Ежедневно выводится примерно 0,1–0,15 г фенола, что во много раз превышает количество, содержащееся в препарате для пробы Манту.
• Пробу Манту делают только в странах третьего мира. Это неправда: туберкулиновый тест делают во всем мире, включая США, Канаду, Германию, Данию и Нидерланды. Однако, из-за низкой заболеваемости в этих странах, туберкулинодиагностику обычно проводят только группам риска.

ПЦР диагностика

Сегодня во многих клиниках можно пройти анализ крови на туберкулез вместо манту. Что это такое? Исследование называется ПЦР – полимеразная цепная реакция, оно является высокочувствительным. Это обусловлено тем, что с его помощью можно выявить даже 1-2 микробактерии возбудителя. Достоверность ПЦР очень высокая– в 98% происходит выявление патологических клеток. Поэтому ученые считают полимеразную цепную реакцию важным открытием в микробиологической науке за последнее время. ПЦР диагностика — это метод выбора Всемирной организации здравоохранения при туберкулезе.

Диагностика ПЦР на туберкулез эффективна и при контроле качества лечения, так как с помощью исследования врач может определить устойчивость бактерий к лекарствам. Устойчивость к лекарственным препаратам при лечении является очень серьезной проблемой, она снижает эффективность лечения в разы, поэтому так важно для врача-фтизиатра знать о ней у конкретного пациента. Это помогает правильно определить тактику лечения.

Также анализ крови на туберкулез просто необходим для людей, которые уже перенесли это заболевание, для выявления рецидивов. Исследование дает возможность диагностировать рецидив на раннем этапе, что позволяет вовремя начать лечение и предупредить развитие серьезных осложнений. Свою эффективность анализ на туберкулез доказал и в тех случаях, когда его локализация внелегочная.

К анализу крови ПЦР, так же как и к иммуноферментному исследованию не нужны особые подготовки. Иногда требуется перед исследованием отменить на некоторое время прием определенных лекарств. Об этом предупредит лечащий врач, который и направит на исследование.

Никаких возрастных ограничений для проведения исследования на микробактерии туберкулеза нет. Анализ крови ПЦР делают взрослым и детям. Так как он абсолютно безопасен. Но все же в школах и садиках чаще детям делают пробу Манту, а ПРЦ диагностику больше используют для взрослых людей. Особенно для тех, у кого ранее был туберкулез.

Проведение исследование ПЦР

Сдать свою кровь на туберкулез можно в специализированной лаборатории. Кровь при анализе на туберкулез собирается в пробирку с веществом, которое не дает ей сворачиваться. Важно соблюдать все условия стерильности, а также запрещено взбалтывать пробирки с кровью на туберкулез при анализе, так как будет затруднен процесс отделения ее клеток от плазмы.

Далее происходит лабораторный процесс, при котором отделяется плазма от клеток, и лаборант через микроскоп определяет есть ли клетки возбудителя в биологическом материале. Заключительный этап исследования основывается на создании определенных условий для клеток. То есть в осадочный материал добавляются вещества, которые спровоцируют реакцию, также при этом должны быть определенные температурные показатели. Таким веществом является фермент транскриптаза. В результате этих действий получается обновленный материал ДНК, который должен расшифровываться специалистом. После этих действий лаборант может дать точное заключение о наличии или отсутствии туберкулеза у человека.

Биологическим материалом для приведения анализа ПЦР может быть, как кровь, так и моча. Для проведения анализа мочи на ПЦР необходима утренняя порция в количестве 20-30 мл. Для проведения исследования крови потребуется 1 мл венозной крови.

Расшифровка

Расшифровки анализов ПЦР можно получить в довольно короткий срок – 1-2 дня. А в некоторых случаях его проводят всего за 4-5 часов. Это уместно если результаты нужны срочно, перед экстренной операцией и т.д.

ПЦР расшифровка может быть простой и сложной. В первом случае результат будет отрицательным и никаких патологических клеток обнаружено не будет, или же их будет очень мало. Сложная ПЦР расшифровка нужна при высоком содержании клеток, так как при этом необходимы точные расчеты. Есть определенные нормы, по которым квалифицированный специалист расшифровывает анализ крови на туберкулез. При этом он может диагностировать стадию и причины заболевания.

«Диаскинтест»

Наука, однако, не стоит на месте, и альтернативы пробе Манту существуют. Вопрос лишь в том, насколько они альтернативны. После расшифровки в 1998 году генома M. tuberculosis появилась возможность разработать абсолютно новые тесты: отечественную кожную пробу «Диаскинтест» и анализы крови IGRA. Однако на роль теста-заменителя пробы Манту больше всех претендует именно «Диаскинтест».

По сравнению с туберкулиновой пробой «Диаскинтест» — это большой шаг вперед. И все потому, что в его состав входит не сотня антигенов, а только рекомбинантный белок CFP10-ESAT6 в стандартном разведении, который не реагирует ни на вакцинный штамм M. bovis, ни на большинство непатогенных микобактерий, — в основном он чувствителен только к палочке Коха. Иными словами, для диагностики инфекции можно использовать лишь этот белок, который показывает наличие или отсутствие клеточного иммунитета к M. tuberculosis. «Диаскинтест» вводят внутрикожно и проверяют результат через 72 часа.

«Туберкулез: возбудитель»

В геноме M. tuberculosis белки ESAT-6 и CFP-10 закодированы в зоне RD1. Они экспрессируются при размножении микобактерии и связаны с ее вирулентностью, поэтому иммунный ответ на эти белки отражает активность инфекционного процесса [10]. В составе «Диаскинтеста» они представлены в виде рекомбинантного белка из двух связанных антигенов ESAT6 и CFP10 (рис. 3), синтезируемых генетически модифицированной культурой бактерий Escherichia coli BL21(DE3)/pCFP-ESAT [6]. По похожей технологии был получен еще один препарат — датский C-Tb, однако в нем другое соотношение ESAT-6 и CFP-10, и он менее чувствителен по сравнению с российской разработкой [4].

Благодаря тому, что в состав «Диаскинтеста» входит не коктейль из полисахаридов, липидов и белков, а только синтетический антиген плюс вспомогательные вещества (фенол, натрия хлорид, «Твин-80»), он является более высокоспецифичным, чем препарат для пробы Манту. То есть при его применении фиксируется меньше ложноположительных результатов, а также аллергических реакций неинфекционного характера [2].

Что касается оценки активности туберкулезного процесса, то в этом «Диаскинтест» на голову опережает конкурентов, потому что для него разработана градация положительного результата (табл. 2). То есть чем больше возбудителя в организме, тем больший размер будет иметь папула. А это значит, что у большинства туберкулезных больных реакция на этот тест более выражена, чем у латентных носителей (единственное, здесь снова имеет место субъективная оценка результата). Прибавим к этому то, что «Диаскинтест» позволяет выявлять носителей с высоким риском развития туберкулеза и снижать количество необоснованной терапии [11], а также снижение выраженности реакции на него у больных, получающих курс антибиотиков [4], и получим весьма ценное конкурентное преимущество перед туберкулиновой пробой.
Таблица 2. Оценка ответной реакции на «Диаскинтест».Составлена по информации из инструкции.

Однако и у «Диаскинтеста» есть недостатки:

• Он не чувствителен к M. bovis и, следовательно, не может диагностировать туберкулезный процесс, вызванный этим видом микобактерии. Конечно, число подобных случаев невелико, но все-таки это снижает эффективность теста.
• Согласно исследованиям, у «Диаскинтеста» достаточно высокая чувствительность в выявлении туберкулезной инфекции как у детей — 90–96,7%, так и у взрослых — 78–81,5% [2]. Тем не менее остаются приблизительно 10–20% случаев, которые он пропускает.
• «Диаскинтест» может быть отрицательным у туберкулезных больных с выраженными нарушениями работы иммунной системы из-за тяжелого течения болезни, а также у ВИЧ-инфицированных (в этом случае чувствительность теста зависит от уровня Т-лимфоцитов CD4+ [2]).

Что нужно знать о кожных пробах?

1. Препарат для пробы Манту 2 ТЕ и «Диаскинтест» — маркеры туберкулезной аллергии, то есть они являются «аллергенами». Туберкулезная аллергия связана с иммунным ответом на M. tuberculosis, который делает организм чувствительным (сенсибилизированным) даже к малому количеству микобактерии. С помощью кожных тестов, содержащих раздражающий фактор (инактивированные частицы палочки Коха), этот процесс можно зафиксировать. Инфекционная аллергия является реакцией замедленного типа, поэтому результат проб оценивают не сразу, а через 72 часа.
2. Кожная реакция на эти пробы является маркером Т-зависимого иммунного ответа, в котором задействованы Т-клетки CD4+ и CD8+ и ассоциированные с ними провоспалительные цитокины, IFNγ, TNF и т.д. Поэтому кожные тесты чувствительны в том числе и к латентному носительству, когда количество микобактерии крайне мало [4], [6].
3. Как видно из таблиц 1 и 2, результаты кожных проб наблюдают в динамике, при необходимости сравнивая между собой значения предыдущих лет. Поэтому нет смысла делать диагностику туберкулеза, что называется «для галочки»: только для медкарты в детский сад или в школу — ее нужно проводить ежегодно (или хотя бы раз в два года).
4. В трактовке результатов кожных проб существует понятие виража — резкое увеличение диаметра папулы на шесть и более миллиметров по сравнению с предыдущей пробой. Кроме этого, виражом считают не связанный с вакцинацией БЦЖ переход отрицательной реакции в положительную. Вираж пробы Манту не всегда означает инфицирование (он может быть и аллергического характера), однако для уточнения ситуации обычно назначают дополнительное обследование и консультацию фтизиатра.

Кому подходит T-SPOT?

Рост распространения ВИЧ-инфекции, увеличение миграционных потоков, особенно из азиатских районов с неблагоприятной эпидемиологической обстановкой, ставит под угрозу здоровье каждого. Треть всех инфицированных даже не догадывается о том, что бактерия уже поселилась в организме.

Поэтому рекомендуется проводить тест T-SPOT хотя бы один раз в полгода:

• детям и беременным;
• пациентам с положительным или сомнительным результатом кожного теста Манту, Диаскин;
• людям с аутоиммунными заболеваниями, получающим иммуносупрессивную терапию (кортикостероиды, цитостатики);
• пациентам после трансплантации органов;
• часто путешествующим людям;
• врачам, военнослужащим;
• курильщикам;
• лицам с кожными заболеваниями и аллергией.

Что выбрать: пробу Манту или «Диаскинтест»?

Если сравнивать диагностическую эффективность тестов, то «Диаскинтест» дает значительную фору туберкулиновой пробе. Тем не менее среди фтизиатров есть адепты как пробы Манту, так и «Диаскинтеста». Впрочем, сравнительные исследования говорят не в пользу проб с туберкулином — ведь реакция на них еще не означает заболевания или заражения микобактерией. Плюс массовая вакцинация БЦЖ резко снижает их диагностические способности [6].

В качестве примера можно привести отечественное исследование, в котором сравнивали результаты кожных проб [6]. Оказалось, что у подростков, живших в близком контакте с больными открытой формой туберкулеза (бактериовыделителями), положительные реакции на введение туберкулина наблюдались в 77,9% случаев, заболевание же было выявлено только у 4,9%. При этом положительные реакции на «Диаскинтест» отметили лишь у 5,6%, из которых в 62,5% случаев выявили туберкулез [6]. По оценкам российских ученых, результативность «Диаскинтеста» в выявлении активного туберкулеза может превышать результативность пробы Манту 2 ТЕ в 40 раз (табл. 3) [11]!
Таблица 3. Сравнение результатов «Диаскинтеста» и пробы Манту в разных ситуациях.[9]

Недостатки методов Манту и ПЦР

Проба Манту – это процедура, для проведения которой должны быть соблюдены определенные условия, так как есть ряд противопоказаний. Ее запрещено проводить детям в таких случаях:

• Если в данный момент у ребенка есть хронические заболевания, которое обострились;
• На теле есть какие-либо высыпки, кожные заболевания;
• Аллергические реакции любого проявления;
• Эпилепсия.

Если провести исследование в этих случаях, то реакция может быть разной, и даже непредсказуемой. Также иногда есть индивидуальная хроническая несовместимость, при этом сдавать кровь на ПЦР – это оптимальная альтернатива Манту.

Главным отличием пробы Манту от анализа ПЦР является то, что у человека может развиться аллергическая реакция и другие осложнения после введения антигена вплоть до анафилактического шока, а анализ крови абсолютно безвреден.

Особых недостатков анализа на микробактерии нет. Но все же специалисты отмечают, что не всегда отрицательные результаты ПЦР исследования является 100% гарантией отсутствия заболевания. Также ПЦР не всегда назначают людям с тяжелым поражением легких, так как в некоторых случаях диагноз не определяется. Малоэффективным анализ крови при туберкулезе будет у больных с иммунодефицитами разных типов.

Анализы крови на туберкулез: плюсы и минусы

Открытие специфичных для M. tuberculosis антигенов позволило разработать лабораторные тесты для диагностики туберкулеза. Это широко известные анализы IGRA (Interferon-Gamma Release Assays), к которым относятся T-SPOT®.TB и QuantiFERON-TB Gold In-Tub («Квантиферон»).

Технология их проведения довольно проста: у пациента берут венозную кровь, смешивают ее с белками ESAT-6, CFP-10 и TB 7.7, после чего наблюдают за реакцией. То есть за количеством Т-лимфоцитов (T-SPOT®.TB) или гамма-интерферона («Квантиферон») [12].

Многие необоснованно считают эти тесты «золотым стандартом» диагностики туберкулеза и его латентных форм, хотя их результаты могут лишь косвенно свидетельствовать об активной инфекции микобактерией или о носительстве — процессах, которые IGRA-анализы не различают [12]. И если ориентироваться на руководства ВОЗ, а также Европейского центра по контролю и профилактике заболеваний (ECDC), «золотых стандартов» в диагностике латентных форм туберкулеза не существует в принципе. Как не существует и адекватной модели латентной туберкулезной инфекции. Поэтому для оценки границ результатов IGRA-анализов приходится использовать так называемые «суррогаты» — показания людей с подтвержденным активным туберкулезом [12]. А это только усложняет ситуацию, потому что у больных туберкулезом снижен клеточный иммунитет, и их показатели не могут служить основой для оценки диагностики латентной инфекции [6].

Вдобавок, отрицательный результат IGRA-анализов крови, не является гарантией отсутствия заболевания; от ложных результатов они тоже не застрахованы. Например, при тестировании «Квантифероном» ложноотрицательные результаты возможны:

• в ранние сроки инфицирования;
• при иммунодефицитных состояниях;
• при неправильном заборе крови или ее транспортировке;
• из-за ошибок во время расшифровки результатов.

Добавлю, что тесты IGRA требуют наличия качественного оборудования, специальных реактивов и квалифицированного персонала, поэтому себестоимость у них довольно высока.

Кроме того, по сравнению с кожными тестами существенным недостатком этих анализов является определение in vitro только образования гамма-интерферона или активности Т-клеток. Поэтому в странах с высокой заболеваемостью (а Россия, несомненно, в их числе с показателем более 50 больных на 100 000 населения [13]) у IGRA-анализов нет никаких дополнительных преимуществ [12]. Тем более что их способность диагностировать туберкулезный процесс колеблется в районе 42–90% для разных возрастных групп, к тому же они не маркируют латентное носительство [12]. Другими словами, для жителей нашей страны анализы крови на туберкулез в общем-то напрасная трата денег, хотя в странах с низкой заболеваемостью (США, Канада, Западная Европа) они более информативны и рекомендованы к замене туберкулиновых проб для привитых БЦЖ [14].

В мире живет более полумиллиарда латентных носителей M. tuberculosis. Причем, далеко не каждый из них в итоге заболевает, потому что размножение микобактерии сдерживает иммунная система. Например, из 100 инфицированных палочкой Коха детей, лишь у одного развивается активная форма туберкулеза, поэтому диагностические тесты направлены не только на выявление латентных носителей, но и на оценку риска развития заболевания [15].

T СПОТ тб — диагностика туберкулеза методом t-spot.tb в СПб

T-SPOT.TB это иммунологический способ диагностики туберкулеза. Способ во многом похож на квантифероновый тест, он занимает 3-4 дня. Для его проведения нужна кровь исследуемого.

Внимание! Забор анализа на Т-СПОТ во время карантинных мероприятий будет осуществляться только по средам.

Также сообщаем, что в связи проведением «дефектуры» тест-систем T-SPOT.tb в ближайшее время усложнится проведение этого анализа. К качестве альтернативы мы предлагаем проведение Квантиферонового теста, который по всем параметрам, включая стоимость исследования, не уступает T-СПОТ. Метод основан на количественном определении интерферона, высвобождаемого Т-клетками крови в ответ на внедрение туберкулезной палочки.

Название T-SPOT.TB расшифровывается так:

• литера T обозначает T-лимфоциты, клетки крови, на основе ответа которых производится исследование;
• Слово SPOT это перевод с английского языка, означающий «пятно». В результате лабораторного опыта в лунке образуются пятна, каждое из которых маркирует Т-лимфоцит;
• .TB это сокращенное международное обозначение туберкулеза.

В России использование методики Т-СПОТ утверждено в 2012 году ФЗ — 2012/648.

Этот способ определения носительства туберкулеза очень чувствителен и информативен, он позволяет исключить ложноположительные реакции на носительство микобактерии туберкулеза в случаях, когда большинство тестов ошибаются или неточны. По разным оценкам и в разных регионах земного шара чувствительность Т-СПОТ оценивается от 87 до 97%, информативность также доходит до 97%. Как вы знаете, диагностика туберкулеза у ВИЧ-инфицированных осложнена, а Т-СПОТ в этих случаях весьма информативен и надежен. Есть и другие случаи, в которых использование этого теста предпочтительно.

СЛУЧАИ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Т-СПОТ

• у детей, привитых БЦЖ, у которых выявлено ложноположительная реакция Манту. В этом случае ценно сделать это малоинвазивное исследование до рентгенографии легких.
• у лиц с аллергическими и аутоимунными заболеваниями;
• у медицинских работников, людей, которые много путешествуют, военных, беременных;
• у заключенных или прибывших из мест заключения;
• у больных наркоманиями;
• у лиц, контактирующих с туберкулезными больными;
• у пациентов, проходящих терапию подавляющую иммунитет, как например, глюкостероидная или лучевая терапия, лечение с замещением функции почек;
• при наличии хронических заболеваний, сопровождающихся снижением или истощением иммунитета, как например, сахарный диабет, уже упоминавшийся ВИЧ, или пневмокониозы;
• при подозрении на внелегочные формы туберкулеза.

Внимание! Вакцинация БЦЖ не влияет на результаты теста T-SPOT.

Важно помнить, что Т-СПОТ является способом количественной диагностики наличия в организме туберкулеза, но не дает возможности отличить активную форму туберкулеза от латентной.

T-SPOT ПРИ ВИЧ. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ

ОПЫТ ДРУГИХ СТРАН

T-SPOT разрабатывался в Оксфордском Университете и первой на вооружение его приняла Европа, в 2004 году он официально включен в стандарты диагностики туберкулеза в Евросоюзе. США и Канада включили Т-СПОТ в официальную диагностику в 2005 году, Южная Корея в 2006, Тайвань в 2009, Китайская Народная Республика в 2010, Российская Федерация и Япония в 2012 году.

ОТЛИЧИЯ Т-СПОТ ОТ ИССЛЕДОВАНИЯ ПЦР

ПЦР – это исследование ДНК, а так как исследуется именно мокрота, ПЦР исключает возможность определить внелегочные формы туберкулеза. Получается, что Т-СПОТ – универсальный способ диагностики туберкулеза, а ПЦР мокроты специфический. Вероятно поэтому Т-СПОТ, наряду с квантифероновым тестом во всем цивилизованном мире именуют «Золотым стандартом» в диагностике туберкулеза.

Анализы крови vs кожные тесты: сравнение эффективности

При оценке эффективности тестов для диагностики туберкулеза чаще всего учитывают два параметра: чувствительность (sensitivity) и специфичность (specificity). Под чувствительностью понимают способность метода выявлять лиц с заболеванием или носителей с высоким риском развития туберкулеза. Под специфичностью — способность теста правильно идентифицировать людей, у которых нет туберкулеза (то есть этот параметр характеризует риск появления ошибочных ложноположительных результатов) [12].

Согласно исследованиям, у анализов крови IGRA достаточно высокая специфичность, но проблемы с чувствительность (табл. 4), поэтому они не могут стать основным инструментом в диагностике туберкулеза, особенно в странах с высокой заболеваемостью. Что касается «Диаскинтеста», то если верить отечественным публикациям [4], [6], [10], [11], он обладает и высокой специфичностью, и высокой чувствительностью (табл. 4). Чудо, а не тест! Однако высокая чувствительность не равняется абсолютной, поэтому и у «Диаскинтеста» случаются «проколы» в виде ложных результатов (чаще всего они наблюдается у детей до двух лет или у лиц с сопутствующими тяжелыми заболеваниями [11]).
Таблица 4. Оценка чувствительности и специфичности анализов крови IGRA по сравнению с туберкулиновой пробой Манту и «Диаскинтестом» в диагностике активного туберкулеза

В общем, анализы крови вряд ли смогут полностью заменить собой пробу Манту 2 ТЕ (и тем более «Диаскинтест», если речь идет об РФ). Но, быть может, они могут стать одним из дополнительных инструментов в диагностике активной туберкулезной инфекции? Да, такая возможность существует, но и здесь есть оговорки. Например, для пациентов с внелегочным туберкулезом, ВИЧ-инфицированных или детей старше пяти лет их можно рассматривать в качестве дополнительного метода. Однако в настоящее время существует ограниченное количество исследований этих тестов [12], поэтому далеко идущие выводы делать рано (табл. 5).
Таблица 5. Оценка специфичности и чувствительности анализов крови IGRA, пробы Манту и «Диаскинтеста» у детей и подростков в диагностике туберкулеза

Общие сведения о Манту

Манту – это проба, которую проводят с помощью подкожного введения малых дозировок туберкулина для проверки наличия у человека заболевания туберкулез или же предрасположенности к нему. Туберкулином называется антиген-вытяжка из бактерий туберкулеза. То есть проба Манту — это анализ на антитела к туберкулезу.

Чаще всего данную пробу проводят, чтобы проверить есть ли туберкулез у детей дошкольного и школьного возрастов.

Это исследование не является прививкой, как думают многие, так как она не создает иммунитет организма к бактериям туберкулеза, а проверяют его наличие. После проведения в месте прокола проявляется припухлость. По прошествии 3 дней результат анализируется. При этом специалист осматривает место прокола, оценивает характер уплотнения: цвет, размер и рисунок. Важно, чтобы человек соблюдал определенные правила ухода в эти дни. Самым важным является то, что уплотнение нельзя мочить и т.д.

Если уплотнение от 4 до 16 мм, то это считается нормой. Показатель при туберкулезе легких – это 17 мм и больше. Но уже доказано, что часто проявляются ложные результаты. Поэтому все популярнее стает ПЦР анализ вместо Манту. Иногда назначают совместную диагностику, то есть нужно сдавать кровь после Манту.

Какой тест все-таки выбрать?

Как говорится, при всем богатстве выбора альтернатив немного. К сожалению, при выборе теста многие руководствуются не его диагностическими характеристиками, а безвредностью для здоровья, потому что фенол в составе кожных проб пугает многих. И существует даже движение против пробы Манту, группа поддержки которого периодически предлагает заменить ее анализами крови IGRA. Но, как было отмечено выше, у подобных страхов нет никаких оснований. В придачу, являясь продуктом жизнедеятельности организма, фенол не накапливается, а выводится вместе с мочой. Поэтому главными критериями все-таки являются чувствительность и специфичность тестов.

На данный момент, наилучшие характеристики демонстрирует только «Диаскинтест». Однако, несмотря на это, в массовой диагностике продолжают использовать пробу Манту 2 ТЕ, и она вполне удовлетворяет фтизиатров. Ведь «Диаскинтест» (также как и IGRA-анализы) не реагирует на инфекцию, вызванную M. bovis. Кроме того, его внедрили в массовую диагностику лишь 10 лет назад, а это слишком небольшой срок, чтобы полностью удостовериться в его диагностической эффективности и «списать» туберкулиновую пробу за ненужностью.

Что касается анализов крови IGRA, то они слишком дороги, не превосходят «Диаскинтест» в чувствительности и не различают латентное носительство. А в мире, где живет более 10 миллионов туберкулезных больных и 1,7 миллиарда носителей микобактерий [3], это является существенным недостатком.

Литература

1. Нестерова Ю. (2017). «6 самых популярных тестов на туберкулез: проблема выбора». МedАboutМe;
2. Корецкая Н.М. (2013). Диаскинтест: новые возможности в диагностике туберкулеза. «Медицина в Кузбассе». 4, 3–8;
3. Болезнь, не думавшая сдаваться;
4. Слогоцкая Л.В., Богородская Е.М., Леви Д.Т., Сельцовский П.П. (2017). 10 лет кожной пробе с аллергеном туберкулезным рекомбинантным (Диаскинтест) и 110 лет туберкулиновой пробе Манту – сравнение эффективности. «БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение». 17, 67–77;
5. «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации». (2003). Приказ № 109 Минздрава РФ;
6. Слогоцкая Л.В. (2013). Туберкулинодиагностика и новые тесты для выявления инфекции. «Медицинский Вестник». 16, 14–15;
7. Филинюк О.В., Колоколова О.В., Кабанец Н.Н. Диагностика туберкулеза у детей и подростков. Томск: СибГМУ, 2013. — 174 с.;
8. Методы выявления туберкулеза у детей (методическое пособие). Москва, 1990;
9. Яковлева Г.П. (2017). ДИАСКИНТЕСТ vs МАНТУ. «Туберкулезная аллергия»;
10. Слогоцкая Л.В. (2014). Иммунологические тесты со специфичными для Mycobacterium tuberculosis белками ESAT-6 И CFP-10. «Туберкулез и болезни легких». 1;
11. Слогоцкая Л.В., Сенчихина О.Ю., Никитина Г.В., Богородская Е.М. (2015). Эффективность кожного теста с аллергеном туберкулезным рекомбинантным при выявлении туберкулеза у детей и подростков Москвы в 2013 г. «Педиатрическая фармакология». 12, 99-103;
12. ECDC guidance: Use of interferon-gamma release assays in support of TB diagnosis. Stockholm: ECDC, 2011. — 32 p.;
13. Нечаева О.Б. (2016). Эпидемическая ситуация по туберкулезу в России. ЦНИИ ОИЗ;
14. Testing in BCG-vaccinated persons. (2016). CDC;
15. Аксенова В.А. и Леви Д.Т. (2012). Туберкулез у детей и подростков. «БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение». 1, 22–27.