Гемофильная палочка, ДНК Haemophilus spp. в крови

Инфекция, вызываемая H. influenzae b

Возбудителем гемофильной инфекции является бактерия Haemophilus influenzae (или палочка Пфейффера) из семейства Pasteurellaceae (Hib). Длительное время гемофилы считались возбудителем гриппа, так как эта инфекция наиболее часто протекает в форме ринофарингита или ОРЗ без специфических особенностей, что и обусловило такое название. Бактерия представляет собой мелкую полиморфную палочку, иногда по форме напоминающую коккобациллу. Спор нет, имеет капсулу. Для культивации требует кровь, специальные добавки и витамины. В зависимости от различий химического строения и антигенных свойств капсулы выделяют 6 серотипов H. influenzae (серотипы a, b,c,d,e,f), а также бескапсульные штаммы.

Инфицирование гемофильными палочками редко приводит к заболеванию, однако спектр инфекционных поражений может быть чрезвычайно широк и зависит от серотипа возбудителя. У взрослых H.influenzae вызывает преимущественно очаговую бронхопневмонию, часто сочетающуюся с выраженным трахеобронхитом. Пневмония редко приобретает тяжелое течение, но в отдельных случаях может осложниться экссудативным плевритом, перикардитом, менингитом, артритом и т.п. Гемофилы входят в состав нормальной флоры верхних дыхательных путей, уровень бессимптомного носительства у детей достигает более 40%.

Наиболее патогенными свойствами и способностью вызывать тяжелые формы заболевания обладает H.influenzae тип b (Hib). Ее вирулентные свойства связаны преимущественно с капсульным полисахаридом и продукцией мембранотоксина.

При инвазивных формах заболевания возбудитель выявляется в стерильных жидкостях организма – СМЖ, крови, плевральной жидкости и др. К неинвазивным формам инфекции относится пневмония (без бактериемии), синусит, средний отит, ринофарингит, конъюнктивит. При генерализации инфекционного процесса развиваются инвазивные формы инфекции, наиболее частым проявлением которых является менингит (51–65%), септицемия – 12%, эпиглоттит – 10%, пневмония (с бактериемией) – 8% в структуре инвазивных Hib инфекций.

Наиболее часто Hib-инфекции подвержены дети в возрасте 6–48 мес, реже новорожденные и дети старше 5 лет. Подавляющее число заболевших приходится на возраст от 3 мес до 3 лет.

Факторами риска являются:

• посещение детских организованных коллективов (ясли, детские сады), особенно закрытого типа (дома ребенка, интернаты);
• искусственное вскармливание;
• иммунодефициты (первичные и вторичные, включая ВИЧ-инфекцию);
• хронические заболевания (сердца, легких, сахарный диабет).

Распространение инфекции происходит воздушно-капельным или бытовым путями передачи. В более редких случаях – при родах, от матери с гемофильной колонизацией генитального тракта.

Источником и основным резервуаром инфекции является только человек. В среднем среди здоровых детей бактерионосители составляют 2–5%, однако в окружении больного доля их может возрастать до 30% и выше. Уменьшение частоты носительства способствует снижению уровня заболеваемости. В странах, где введена вакцинация против Hib-инфекции, доля носителей в популяции здоровых детей снизилась до 0,5–1%.

Показания к обследованию

• Исследования по эпидемиологическим показаниям – среди контактных лиц в очаге Hib-инфекции (чаще всего Hib-менингит);
• профилактические исследования – с целью выявления уровня носительства в популяции, особенно в закрытых детских коллективах;
• диагностические исследования – при подозрение на заболевание эпиглоттитом, пневмонией, менингитом, септицемией, отитом, синуситом, гнойным артритом, остеомиелитом.

Материал для исследований

• Мокрота, лаважная жидкость, пунктаты (при подозрении на пневмонию); гнойное отделяемое, пунктаты; (средний отит, синусит); СМЖ, кровь; (менингит, менигоэнцефалит); кровь (септические состояния); пунктаты (гнойный артрит, остеомиелит); секционный материал; мазок из зева (обследование контактных в очаге Hib–менингита и проведение профилактических исследований) – культуральные исследования;
• СМЖ, кровь, пунктаты – обнаружение фрагментов ДНК;
• СМЖ, кровь – обнаружение АГ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает

микроскопию исследуемого материала, посев материала с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности; обнаружение генетических фрагментов ДНК Hib и АГ Hib в стерильных жидкостях организма.

Дифференциальная диагностика

проводится с микробными агентами:

• При эпиглоттите – с возбудителями вызывающими истинный и ложный круп (C.diphtheriae, S.pyogenes, различные вирусы);
• при менингите – с возбудителями, вызывающими гнойный менингит (N.meningitidis, S.pneumoniae, S.aureus и др.);
• при пневмонии – S.pneumoniae, C.pneumoniae, M.pneumoniae, L.pneumophila, S.aureus, семействомEnterobacteriaceae, вирусами гриппа;
• при отите и синусите – S.pneumoniae, Ps.aeruginosa, S.aureus, M.catarrhalis, S.pyogenes, дрожжевые грибки родаCandida;
• при гнойном артрите, остеомиелите – S.aureus, E.coli, анаэробная инфекция.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики.

Микроскопические исследования используют для выявления гемофильных палочек в разных видах биологического материала: ликворе, крови, пунктатах стерильных локусов, пунктатах нестерильных локусов (мокрота, мазки из зева, придаточных пазух, уха и др.). Микроскопия, как самостоятельное исследование, обычно не проводится, так как имеет малую диагностическую ценность. Микроскопическое исследование может использоваться только для решения вопроса пригодности мокроты или лаважной жидкости для посева (в мазке должно находиться более 25 сегментоядерных лейкоцитов и менее 10 эпителиальных клеток в поле зрения), а также определения микробных ассоциаций.

Для посева с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности используют материалы стерильных локусов (кровь, ликвор, синовиальную, перикардиальную, плевральную жидкости) и различный материал из нестерильных локусов.

Важной проблемой для лечения Hib-инфекции является рост устойчивости β-лактамным антибиотикам, в первую очередь ампициллину, обусловленных продукцией плазмидных β-лактамаз. Кроме того, в мире отмечается увеличение резистентности к гентамицину, эритромицину, левомицетину.

При определении чувствительности к антибиотикам культуры, выделенной из нестерильных локусов, в первую очередь исследуют устойчивость к ампициллину, ампициллину/сульбактаму, ко-тримоксазолу. Желательно провести тест на продукцию β-лактамаз с нитроцефином. В качестве дополнительных препаратов для характеристики штамма в исследование включают цефалоспорины II–III поколения, тетрациклины, макролиды, хлорамфеникол, фторхинолоны.

Штаммы, выделенные из ликвора и крови, исследуют на чувствительность к ампициллину, цефоласпоринам III поколения, карбапенемам, хлорамфениколу, другие препараты (тетрациклины, макролиды, фторхинолоны) добавляются для более полной характеристики культуры.

Обнаружение АГ Hib в стерильных жидкостях организма (ликворе, крови) выполняют при использовании наборов реагентов, основанных на реакции латекс-агглютинации или коагглютинации.

Обнаружение фрагментов ДНК Hib проводят методом ПЦР. Исследование основано на обнаружении специфического фрагмента гена bex A, кодирующего связанный с капсулой белок возбудителя и проводится только с материалом, полученным из стерильных локусов (СМЖ, кровь, пунктаты)

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований.

Диагноз Hib-инфекция считается установленным в случае:

• изоляции бактерий H.influenzae тип b из образцов биоматериала;
• выявления бактерий, сходных по морфологии с гемофильными палочками (полиморфных грам-отрицательных палочек), в образцах биоматериала, взятых из стерильных локусов и получения положительного результата выявления АГ в реакции латекс-агглютинации, используемой для выявления АГ;
• обнаружения специфических фрагментов ДНК Hib методом ПЦР в образцах биоматериала, взятых из стерильных локусов.

Haemophilus (гемофилюс )

Гемофилюс

(
Haemophilus
) — род грамотрицательных бактерий.
Haemophilus
имеют вид небольших палочек и неподвижны. Многие
Haemophilus
являются комменсалами в человеческом организме.
Haemophilus
обнаруживается в желудке здоровых людей (при условии отсутствия в нём в доминирующем количестве
Helicobacter pylori
) (Engstrand L., 2012).

Бактерии Haemophilus — возбудители заболеваний человека

Некоторые виды Haemophilus
вызывают серьёзные заболевания человека. В частности,
Haemophilus influenzae
, называемая также гемофильной палочкой или палочкой Пфейфера (или Пфайфера), является возбудителем так называемых гемофильных инфекций человека, включая гнойный менингит, острую пневмонию, септицимию, воспаления надгортанника, гнойный артит, перикардит, синуситы, отиты и другие заболевания дыхательных путей.

Haemophilus ducreyi

является возбудителем венерического заболевания — мягкого шанкра.

В редких случаях Haemophilus parainfluenzae,
входящий в состав нормальной микрофлоры человека, может вызывать оппортунистические инфекции, в частности, эндокардиты у детей.

Haemophilus aegyptius

(палочка Коха-Уикса) — возбудитель бразильской пурпурной лихорадки (код по МКБ-10 A48.4), конъюктивита у детей до 10 лет, без лечения развивающуюся в опасное системное заболевание.

Haemophilus spp

. выделяются при синдроме раздражённого кишечника (СРК) с диареей, эзофагите, пищеводе Барретта, бронхиальной астме;
Haemophilus influenzae
– при пневмонии, синуситах, менингитах, отитах, артритах (Капреева Ю.С. и др.).

Группа HACEK

Ряд видов рода Haemophilus
, в частности,
Haemophilus parainfluenzae, Haemophilus aphrophilus, Haemophilus paraphrophilus
и некоторые другие, а также бактерии других родов:
Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Cardiobacterium hominis, Eikenella corrodens
и
Kingella kingae
образуют так называемую группу HACEK. Это входящие в состав нормальной микрофлоры ротовой полости человека, грамотрицательные, труднокультивируемые, медленно растущие микроорганизмы, для жизнедеятельности которых требуется атмосфера, насыщенная углекислым газом. Бактерии группы HACEK ассоциированы примерно с 5-10% случаев местного эндокардита пациентов, не использующих внутривенные препараты. Кроме инфекционного эндокардита, бактерии этой группы вызывают раневые инфекции (в частности, при укусах), абсцесс мягких тканей, абсцесс головного мозга, эндофтальмит, паротит, периодонтит, эмпиему и бактериемию без эндокардита и остеомиелит. Кроме того, были выявлены связанные с ними редкие случаи эндометрита и инфекции мочевых путей.

Haemophilus в систематике бактерий

Род Haemophilus
входит в семейство
Pasteurellaceae
, порядок
Pasteurellales
, класс гамма-протеобактерии (лат.
γ proteobacteria
), тип протеобактерии (лат.
Proteobacteria
), царство Бактерии.

В род Haemophilus

входят следующие виды:
Haemophilus aegyptius
(палочка Коха-Уикса)
, [Haemophilus] ducreyi
(палочка Дюкрея)
, Haemophilus haemoglobinophilus, Haemophilus haemolyticus, Haemophilus influenzae
(палочка Пфейфера)
, Haemophilus influenzae-murium, Haemophilus massiliensis, Haemophilus paracuniculus, Haemophilus parahaemolyticus, Haemophilus parainfluenzae, Haemophilus paraphrohaemolyticus, [Haemophilus] parasuis, Haemophilus pittmaniae, Haemophilus quentini, Haemophilus simiae, Haemophilus sputorum, Haemophilus taxon C, Haemophilus genomosp. P1
.

В составе вида Haemophilus influenzae

выделена в отдельную <�группу без ранга>
Haemophilus influenzae biotype aegyptius
. Раньше к роду
Haemophilus
относились, в частности, виды:

• Haemophilus vaginali
  s, в настоящее время перенесён в род
  Gardnerella
  и именуется
  Gardnerella vaginalis
• Haemophilus actinomycetemcomitans
  , перенесён в род
  Aggregatibacter
  и называется
  Aggregatibacter actinomycetemcomitan

Вакцины и антимикробные средства, активные в отношении Haemophilus

Следующие антибиотики (из числа представленных в настоящем справочнике) активны в отношении Haemophilus
:

• ципрофлоксацин — активен в отношении Haemophilus spp.
• кларитромицин и азитромицин — активны в отношении H. influenzae, H. parainfluenzae
  и
  H. ducreyi
• норфлоксацин — активен в отношении H. ducreyi, H. influenzae, H. aegyptius
• левофлоксацин и моксифлоксацин — H. influenzae, H. parainfluenzae
• доксициклин и тетрациклин — H. ducreyi, H. influenzae
• амоксициллин — H. influenzae
• джозамицин — H. influenzae
• рифабутин — H. influenzae

В Анатомо-терапевтической-химической классификации (АТХ) в разделе «J07 Вакцины» имеется отдельный раздел «J07AG Вакцины против Haemophilus influenza
B». В России допущены к применению три препарата–вакцины для профилактики заболеваний, вызванных
Haemophilus influenzae
типа b: Хиберикс (англ.
Hiberix
), Акт-ХИБ (англ. Act-HIB) и «Вакцина гемофильная тип b конъюгированная» (производство Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии).

Инструкция фирмы-производителя вакцины против Haemophilus influenzae

тип
b
для США на английском языке, pdf: «Hiberix », GlaxoSmithKline.

На сайте GastroScan.ru в разделе «Литература» имеется подраздел «Микрофлора, микробиоценоз, дисбиоз (дисбактериоз)», содержащий статьи, затрагивающие проблемы микробиоценоза и дисбиоза отделов ЖКТ человека.

Назад в раздел

Гемофильная палочка, ДНК Haemophilus spp.

Гемофильная палочка, ДНК Haemophilus spp., качественный

— определение ДНК гемофильной палочки (Haemophilus spp.) в соскобе, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».
Метод ПЦР
— позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы ДНК микроорганизма, не выявляемые другими методами. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий, специфичных для данного возбудителя участка ДНК.

С помощью ПЦР-анализа можно диагностировать инфекцию в остром периоде и выявлять случаи носительства.

Гемофильная палочка

(Haemophilus spp.)

Источником инфекции является больной человек (носитель).

Основной путь передачи инфекции — воздушно-капельный.

Инфицирование палочкой инфлюэнцы может быть диагностировано у пациентов разного возраста, но наиболее часто может наблюдаться у дошкольников до 4 лет. Смертность фиксируется приблизительно в 10% случаев. В связи с этим крайне необходимо вовремя получить консультацию у специалиста, сдать анализы и провести соответствующую терапию.

У детей Haemophilus influenzae является одной из основных причин детского менингита. Менингит, вызванный данной палочкой у детей от 1 до 2 лет протекает тяжело, с прогрессирующим ступором и комой. Смертность может достигать от 50 до 75% случаев. Восприимчивость людей к инфекции довольно высока и обнаруживается выраженная зависимость заболеваемости при иммунодефиците. Выявлено широкое носительство в верхних дыхательных путей данной палочки среди населения, которое может достигать 90% среди здоровых лиц.

Исследование Haemofilus influenza методом ПЦР производится в отделе молекулярно-генетических исследований научного центра ДНКОМ. Его основное преимущество заключается в том, что он относится к прямым методам исследования. В период полимеразной цепной реакции в случае положительного результата обнаруживается генетический материал — ДНК гемофильной палочки в образце.

Показания
Анализ на гемофильную палочку следует назначать при подозрении на острую воздушно-капельную инфекцию, а также при следующих воспалительных заболеваниях:

• менингитах;
• отитах;
• синуситах;
• пневмониях;
• конъюнктивитах;
• гнойных артритах;
• острый эпиглоттитах (воспаление надгортанника);
• остеомиелитах (поражение участка костного мозга);
• септицемии (инфицирование крови);
• мастоидитах (осложнение гнойного отита).

Подготовка
За месяц до сдачи исследования необходимо исключить прием антибиотиков.

Мужчины:

• соскоб уретры.
  Рекомендуется сдавать через 2 часа после последнего мочеиспускания;
• первая порция свободно выпущенной мочи.

Женщины:

• соскоб уретры, цервикального канала, влагалища
  . Сдача соскоба не допускается в дни менструации. За трое суток до взятия необходимо отказаться от применения вагинальных свечей, тампонов, спермицидов, за сутки — исключить половые контакты. Нельзя спринцеваться накануне проведения обследования. После УЗИ-исследования с применением вагинального датчика, кольпоскопии, биопсии — должно пройти не менее 48 часов.

Интерпретация результатов
Ответ выдается в качественном формате: «обнаружено» или «не обнаружено»

В норме ДНК возбудителя не обнаруживается.